技术支持 操作指南

NovoCellTM 心肌细胞操作流程

发布时间:2016-07-16 04:25:19   浏览:1018

培养材料准备:
    atrigel包被培养皿/瓶:在4℃冰面上,将Matrigel以1:80的比例稀释形成工作液,往培养皿/瓶中添加工作液至完全覆盖皿/瓶底(建议1ml/六孔板单孔),37℃包被1小时。如果暂时不用,可用塑封膜封口后2-8℃储存,并于1周内使用,保存期间Matrigel工作液需始终保持完全覆盖皿底。

心肌细胞维持:
 1. 心肌维持培养基(HELP SCI: Cat# NM1001-100)复温至室温。
 2. 获得的心肌细胞用心肌维持培养基培养,每48小时换液一次T-25培养皿中每次更换5ml心肌细胞培养基,更换培养基时,避免刮碰细胞生长的侧壁;或者加入标准量150%的维持培养基,每72小时
     换液一次。 
 3. 细胞在6-8周内性状稳定。

 4. 如果需要长期培养,为了维持细胞稳定性和纯度,需要定期采用心肌细胞纯化培养基(HELP SCI: Cat# NM1003-030)进行处理, 一般每6周处理一次。


心肌细胞再接种
 1. 如果需要将心肌细胞按合适密度接种到新的培养皿/瓶中,可对心肌细胞进行再接种,再接种操作会导致20%左右的细胞死亡,即损失20%的细胞。
 2. 室温平衡心肌接种培养基、PBS溶液和心肌细胞消化液(HELP SCI: Cat# NM1002-020),取出包被过Matrigel的培养皿/瓶,吸去包被液并加入适量心肌接种培养基,置于5% CO2的37℃恒
    温细胞培养箱中。
 3. 吸走心肌维持培养基,并且加入DPBS(ThermoFisher: Cat# 14190144)溶液清洗一次。
 4. 移除DPBS,加入预热至37℃的心肌细胞消化液使之完全覆盖皿/瓶底。
 5. 37℃孵育2-3分钟,显微镜下观察到大部分细胞相互分离,表明达到理想的消化时间。
 6. 用枪扇形吹打培养皿/瓶底,使皿/瓶底贴附的心肌细胞脱落,将细胞转移至15ml离心管中,再向皿/瓶中加入适量中和液溶液(建议使用含有5%FBS的培养基中和)润洗皿/瓶底,收集剩余细胞加5ml
     离心管。 
     注:吹打力度要轻柔,避免损伤心肌细胞
 7. 300g离心5分钟。
 8. 小心移除上清,用心肌培养基(HELP SCI: Cat# 2号瓶)重悬细胞,轻柔吹打混匀,并接种到准备好的培养皿/瓶中 八字晃动使细胞均匀分布。
 9. 5% CO2的37℃恒温培养箱中培养48小时,更换为心肌培养基。